發(fā)布時(shí)間: 2022-05-30 點(diǎn)擊次數(shù): 1563次
酶活檢測(cè)試劑盒測(cè)定過程中所需要的儀器和試劑:可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿(光徑10mm)、研缽/勻漿器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。
基于高度水溶性的四唑鹽進(jìn)行測(cè)定。WST-8在電子介體的作用下可還原生成水溶性甲瓚產(chǎn)物,產(chǎn)生顏色反應(yīng)。WST-8被細(xì)胞中的脫氫酶還原而生成橙色產(chǎn)物(甲瓚),可溶于組織培養(yǎng)基中。細(xì)胞中脫氫酶產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物的量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。CCK-8法應(yīng)用非常廣泛,如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。
細(xì)胞活性是判斷體外培養(yǎng)細(xì)胞在某些條件下是否能正常生長(zhǎng)的重要指標(biāo),如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養(yǎng)條件變化等。細(xì)胞活性檢測(cè)方法有很多種,如臺(tái)盼藍(lán)染色法、克隆(集落)形成法、、ATP含量測(cè)定法、熒光染色法、比色法(MTT法)等。
一些熒光染料對(duì)死細(xì)胞和活細(xì)胞有不同的作用效果,利用熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞活性。如碘化丙錠(PI),被活細(xì)胞排斥但能穿透正在死亡或已經(jīng)死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜,因此活細(xì)胞不被染料染上色,只有死細(xì)胞或是凋亡細(xì)胞才能染上紅色。
吖啶橙(AO)能透過質(zhì)膜完整的細(xì)胞,嵌入細(xì)胞DNA,使之發(fā)出明亮的綠色熒光。溴化乙錠(EB)僅能透過胞膜受損的細(xì)胞,嵌入DNA,發(fā)橘紅色光。也可應(yīng)用AO-EB雙染法鑒定細(xì)胞活性。這種檢測(cè)方法相比傳統(tǒng)的染料,具有靈敏度高,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果容易分辨等特點(diǎn),而且利用雙染法還可以分辨活細(xì)胞、凋亡早期細(xì)胞、凋亡晚期細(xì)胞、死亡細(xì)胞。在細(xì)胞凋亡的檢測(cè)上有很廣泛的應(yīng)用。